Identificação de marcadores de DNA microssatélites polimórficos na geração 2 de mini melancias tratadas com raios gama
Izadora Cristina Romão Pitombeira
UFERSA
Ioná Santos Araújo Holanda
Maria de Fátima Duarte de Souza Neta
Willianny Karem de Sousa
Sarah Sanny de Lima Peixoto
Palavras-chave: Melhoramento, Cucurbitáceas, Genética Molecular, Marcadores SSR, Radiação
Resumo
O processo de indução de mutações a partir da radiação é uma atividade recorrente no melhoramento de plantas para atender características de interesse, como maior qualidade nutricional e resistência à doenças. A mini melancia [Citrullus lanatus (Thunberg) Matsumura e Nakai] é uma cultivar com potencial para essa prática, devido a sua importância para o agronegócio, associada à preferência dos consumidores. Neste sentido, após a exposição à radiação, é necessário identificar o sucesso da indução de mutações, sendo os marcadores moleculares microssatélites (SSR) uma ferramenta robusta para determinar possíveis alterações a nível de DNA. Vantosos por apresentarem natureza codominante, ampla cobertura do genoma e reprodutibilidade. Dessa forma, o trabalho teve como objetivo selecionar marcadores SSR capazes de identificar polimorfismos em linhas mutantes de mini melancia da geração M2 proveniente da indução de mutação por raios-gama co-60, facilitando a posterior seleção de genótipos de interesse. Foram coletadas cinco folhas de cada planta dos tratamentos de 100 Gy, 200 Gy e controle sem indução de mutação. Em seguida, o DNA foi extraído pelo método CTAB, a quantificação realizada por eletroforese horizontal em gel de agarose 1% corado com brometo de etídio e as imagens registradas em fotodocumentador acoplado a luz U.V. Após a diluição para a concentração de 10 ng/μl, o DNA molde foi utilizado para compor o mix de PCR, sendo avaliados 10 primers SSR de melancia, seguido de eletroforese em gel de agarose a 3% e as imagens registradas em fotodocumentador. Apesar de observar a presença de contaminação por RNA devido ao arraste e nuvens brancas visualizadas nas imagens, houve sucesso no processo de extração. As linhas de 100 Gy (Y1R3P17-1) e 200 Gy (Y2R4P3-1) foram selecionadas para as reações de PCR devido à alta concentração de DNA. Os 10 primers SSR foram úteis na geração de bandas com boa qualidade e intensidade, demonstrando sucesso no processo de amplificação. Sendo eles, BVWS00048, BVWS00106, BVWS00155, BVWS00208, BVWS00297, BVWS00314, BVWS00441, BVWS00658, BVWS00948 e BVWS01734. Contudo, apenas os primers BVWS00106, BVWS00441 e BVWS00948 foram capazes de identificar polimorfismos entre as duas amostras avaliadas. Dessa forma, esses marcadores foram selecionados e identificados como potencialmente úteis para estudos futuros de melhoramento e identificação de plantas mutantes associadas a uma determinada característica de interesse, como melhoria na nutrição ou adaptação a condições adversas.